GDF-8 (Миостатин)

📦 Всяка поръчка е покрита от нашата Политика за повторна изпратка — ако вашата пратка не пристигне в рамките на 20 работни дни, ние я изпращаме отново.

Какво е GDF-8 (Миостатин)?

GDF-8 (Growth/Differentiation Factor 8), обикновено известен като миостатин, е член на суперсемейството на трансформиращия фактор на растежа бета (TGF-β) и основният физиологичен негативен регулатор на скелетната мускулна маса. За първи път е характеризиран от McPherron, Lawler и Lee (Nature 1997) като секретиран протеин, чиято целенасочена дисрупция в мишки произвежда животни с два до три пъти по-голяма скелетна мускулна маса в сравнение с дивите контроли. Същият ген бързо е идентифициран като причина за фенотипа “двойна мускулатура” при белгийската синя и пиемонтската говеда, фенотипа Bully Whippet при надбягващите хрътки и един документиран човешки случай на изразена инфантилна хипермускулатура (Schuelke et al., NEJM 2004) — всички носещи загуба на функция мутации в MSTN.

Зрелият миостатин се генерира чрез посттранслационна обработка на 375-аминокиселинен препротеин: сигналният пептид се отстранява по време на секрецията, след което пропротеиновата област (~243 аа) се отрязва от фурин протеази, освобождавайки активния 109-аминокиселинен C-краен зрял миостатин. Активната форма е хомодимер от две зрели мономерни вериги, ковалентно свързани чрез междумолекулна дисулфидна връзка, с видима маса приблизително 25,8 kDa при нередуциращ SDS-PAGE. Протеинът приема каноничната TGF-β цистеинова структура и се свързва с активиновия рецептор тип IIB (ActRIIB) с висока афинитет, за да инициира Smad-опосредвана сигнализация. Рекомбинантният GDF-8 се доставя като високочист лиофилизиран прах за реконституция с бактериостатична вода. Миостатинът е неодобрен от FDA, EMA, MHRA или друг голям регулатор за терапевтична употреба при хора. Изследователският GDF-8, продаван тук, се доставя само за лабораторни изследвания и не е предназначен за човешка или ветеринарна употреба.

Механизъм на действие — ActRIIB сигнализация и Smad2/Smad3 ос

Това, което прави GDF-8 механистично отличителен сред лигандите на TGF-β суперсемейството, е неговата доминираща роля като тоничен спирач на мускулния растеж чрез добре характеризирана тристепенна сигнална каскада, документирана в публикувани изследвания:

• Свързване с ActRIIB рецептор и регрутиране на тип I рецептор — Зрелият миостатин хомодимер се свързва с активиновия рецептор тип IIB (ActRIIB) на повърхността на скелетните мускулни влакна и други типове клетки. ActRIIB е конститутивно активна серин/треонин киназа, която, след като се свърже с миостатин, регрутира и трансфосфорилира тип I рецепторите ALK4 (ActRIB) и ALK5 (TβRI). Стехиометрията на лиганд-рецептор е 2:2:2 хетеротетрамер в активния комплекс. Нокаут на ActRIIB произвежда фенотип, подобен на нокаут на миостатин, потвърждавайки идентичността на рецептора.
• Фосфорилиране и ядрен транслокация на Smad2/Smad3 — Фосфорилираните рецептори от тип ALK4/ALK5 фосфорилират рецептор-регулираните Smads — конкретно Smad2 и Smad3 в пътя на миостатина. Фосфо-Smad2/Smad3 образуват хетеромерен комплекс със Smad4 (общ Smad) и се транспортират към ядрото, където се свързват с Smad-свързващи елементи в промоторите на целевите гени и рекрутират транскрипционни кофактори. Пътят на Smad е доминиращият сигнален изход за миостатина в скелетните мускули.
• Транскрипционни ефекти надолу по веригата — увеличаване на atrogin-1/MuRF1 и потискане на белтъков синтез — Ядреният Smad комплекс координира транскрипционна програма, която насърчава мускулна атрофия чрез три събиращи се механизма: индукция на убиквитин-лигазните атрогени (atrogin-1 / Fbxo32 и MuRF1 / Trim63) за ускоряване на белтъковата деградация; инхибиране на Akt/mTOR-опосредвания белтъков синтез чрез кръстосана връзка с IGF/инсулиновата ос; и потискане на миогенни регулаторни фактори (MyoD, миогенин) за забавяне на сателит-клетъчно задвижвания ремонт. Нетният ефект е намалено натрупване на мускулен белтък и, при високи дози или хронична експозиция, явна атрофия.

Важно за изследователския дизайн е, че GDF-8 действа като тоничен инхибитор при физиологични условия — мускулната маса се регулира от баланса между тонуса на миостатина (атрофичен) и сигнализирането на IGF/Akt/mTOR (анаболно). Ето защо Фолистатин 344 (антагонист на миостатин/активин) и рекомбинантен GDF-8 (самият агонист) се използват и в мускулни изследвания — антагонистът премахва спирачката, докато рекомбинантният лиганд е експерименталният инструмент, който количествено определя колко силна е спирачката и валидира активността на антагониста в асоциативни изследвания на рецепторно свързване и репортерни клетъчни тестове.

Публикувани изследователски приложения

Рекомбинантният GDF-8 се използва в лабораторни изследователски контексти, които изследват:

• Изследвания на мускулна атрофия и разпад — in-vitro тестове за атрофия на миотуби, ex-vivo мускулни препарати, in-vivo администрация за индуциране на възпроизводими атрофични фенотипи за изследване на стратегии за интервенция (McPherron et al., Nature 1997; Lee, Annu Rev Cell Dev Biol 2004)
• Валидиране на антагонисти на миостатин — тестове за афинитет на свързване, тестове за сила на неутрализиращи антитела, тестове за заемане на рецептори за програми за откриване на лекарства, насочени към пътя на миостатина; каноничен изследователски инструмент за валидиране фолистатин 344, разтворими ActRIIB-Fc фузионни протеини и анти-миостатин антитела
• Изследване на сигналния път Smad2/Smad3 — кинетика на фосфорилиране на Smad, визуализация на ядрена транслокация, тестове с репортерни елементи за свързване на Smad, кръстосана връзка с други членове на TGF-β пътя
• Изследване на транскрипцията на атрогени — анализ на промоторите atrogin-1 (Fbxo32) и MuRF1 (Trim63), активност на убиквитин-протеасомната система, кръстосана комуникация между автофагия осите
• Модели на кахексия и саркопения — модели на кахексия при гризачи с тумор, саркопения при старещи мишки, атрофия, индуцирана от денервация — рекомбинантен GDF-8, използван за усилване или възпроизвеждане на фенотипа на отслабване
• Изследвания на сърдечната и други тъкани — миостатинът се експресира на по-ниски нива в сърцето, мастната тъкан и други тъкани; публикувани изследвания разглеждат ефектите на GDF-8 в модели на кардиомиоцитна хипертрофия и биология на мастната тъкан
• Сравнителни изследвания на TGF-β суперсемейството — сравнение с близкородствения GDF-11 (90% идентичност на последователността в зрелия домен) и активин А (свързва се със същата рецепторна система); механистичен анализ на селективността на рецепторите
• Обратнофармакологично свързване с Follistatin 344 — съвместно прилагане с Фолистатин 344 като антагонистичната част позволява пряко количествено определяне на стехиометрията на свързване миостатин/антагонист и спасяване на GDF-8-индуцираната атрофия в изследователски модели.

За по-широк контекст относно мястото на GDF-8 в анаболния/мускулен изследователски пейзаж, вижте Фолистатин 344 като каноничен антагонист на миостатина, IGF-1 LR3 за анаболната част на противоположния път (директен агонизъм на IGF-1R), и TB-500 за системни изследвания на възстановяване на мускулите и тъканите. Разгледайте пълния каталог с изследователски пептиди за свързани съединения.

Налични дози и концентрации

MedsBase предлага рекомбинантен GDF-8 (Миостатин) в лиофилизирани флакони от 1 mg. Флаконът е наличен в пакети от 10 или 20 флакона с пълни указания за реконституиране:

GDF-8 е ~25,8 kDa рекомбинантен хомодимерен протеин с чистота ≥95% при HPLC. Форматът с флакон от 1 mg покрива типичния изследователски диапазон от дози: наномоларни работни концентрации за in vitro свързващи тестове и тестове с репортерни клетки консумират малки части от флакона; in vivo приложение в гризачни модели използва дози от микрограми на инжекция, които консумират повече от флакона на протокол.

Как се сравнява — GDF-8 (Миостатин) срещу Фолистатин 344

Рекомбинантните GDF-8 и Фолистатин 344 са двойка с обратна фармакология: GDF-8 е лигандът, а Follistatin 344 е протеинът с висок афинитет, който го секвестира. Те често се използват заедно в изследванията, тъй като функцията на антагониста може да бъде количествено определена само спрямо лиганда. Връзката между тях е аналогична на други добре познати двойки с обратна фармакология (напр. агонист + антагонист на един и същ рецептор), но на ниво лиганд-свързващ протеин, а не на ниво рецептор.

За изследвания на мускулната тъкан, двойката се използва заедно по три основни начина: (1) измерване на афинитета на свързване (повърхностен плазмонен резонанс, ELISA, изотермична титрационна калориметрия) на взаимодействието между фолистатин и миостатин; (2) клетъчни тестове за атрофия/възстановяване, при които GDF-8 предизвиква атрофия на миотубите, а съвместното лечение с фолистатин се тества за възстановяване; и (3) in-vivo валидиране, при което GDF-8 усилва фенотип на отслабване, който съвместното прилагане на фолистатин намалява. Двете протеини са механистично допълващи се и рядко се изследват изолирано.

Съхранение и реконституиране

Преди реконституиране: Съхранявайте лиофилизирани флакони в хладилник при 2–8 °C в оригиналната опаковка за краткосрочно използване. За дългосрочно съхранение на неотворени флакони, замразете при −20 °C. Лиофилизираният GDF-8 е стабилен в хладилник до 12 месеца и при −20 °C до 24 месеца — малко по-кратко от малките синтетични пептиди, тъй като по-големият рекомбинантен димер, свързан с дисулфидни връзки, е по-податлив на неправилно сгъване и агрегация с времето. Избягвайте цикли на замразяване и размразяване на лиофилизирания прах.

Процедура за реконституиране: инжектирайте бактериостатична вода по страничната стена на флакона (не директно върху лиофилизираната каша). За флакон от 1 mg, 1.0 mL бактериостатична вода дава работна концентрация от 1 mg/mL. Разбъркайте леко — не не Съхранявайте в хладилник при 2–8 °C и използвайте в рамките на 30 дни за оптимална стабилност. Не замразявайте реконституирания разтвор — рекомбинантните димерни протеини са особено чувствителни към денатурация при замразяване и размразяване, което води до агрегация и загуба на активност за свързване с рецептори. Изхвърлете всеки флакон, който показва мътност, утайка или промяна в цвета. За тестове за афинитет на свързване, изискващи прецизна калибрация на доза-отговор, използвайте прясно реконституиран разтвор в рамките на 7 дни за най-воспроизводими резултати.

След реконституиране: Съхранявайте в хладилник при 2–8 °C и използвайте в рамките на 30 дни за оптимална стабилност. Не замразявайте реконституирания разтвор — рекомбинантните димерни протеини са особено чувствителни към денатурация при замразяване и размразяване, което води до агрегация и загуба на рецептор-свързваща активност. Изхвърлете всяка ампула, която показва мътност, утайка или промяна на цвета. За изследвания на свързваща афинитет, изискващи строга калибрация на доза-отговор, използвайте прясно реконституиран разтвор в рамките на 7 дни за най-воспроизводими резултати.

Често задавани въпроси

За какво се използва GDF-8 (Миостатин) в изследванията?

Рекомбинантният GDF-8 се използва в лабораторни изследвания като каноничен агонист на миостатиновия път — той е експерименталният инструмент за индуциране на възпроизводими фенотипове на мускулна атрофия, характеризиране на Smad2/Smad3 сигнализирането, валидиране на миостатинови антагонисти (включително Фолистатин 344 и протеини за сливане ActRIIB-Fc), както и за определяне на стехиометрията на свързване във фармакологични тестове. Тя не се използва за “подобряване” на нищо в изследователските модели — това е негативният регулатор, който изследователите искат да разберат и в крайна сметка да инхибират. Продаваната тук изследователска категория GDF-8 е не Одобрен от FDA и се доставя строго за лабораторни изследвания.

Как GDF-8 се различава от GDF-11?

GDF-8 (миостатин) и GDF-11 имат приблизително 90% аминокиселинна идентичност в зрелия домен и се свързват със същия ActRIIB рецептор със сравним афинитет. Функционалните им роли са частично припокриващи се, но различни в тъканното разпределение: GDF-8 се експресира предимно в скелетните мускули и е основният регулатор на мускулната маса; GDF-11 се експресира по-широко и се изследва в сърдечни, невронни и хематопоетични контексти. Близкото последователно сходство прави разработването на селективни антагонисти основен фокус на текущите изследвания.

Каква е типичната изследователска доза на GDF-8?

Публикуваните преклинични протоколи обикновено използват работни концентрации от 10–100 ng/mL за in-vitro експерименти с клетъчни култури (тестове за атрофия на миотуби, тестове с репортерни клетки, изследвания на свързване) и 0.1–10 mcg на администрация за in-vivo протоколи за индуциране на атрофия при гризачи. Флакон от 1 mg, реконституиран с 1.0 mL бактериостатична вода, дава 1 mg/mL — разреждането в PBS или културна среда дава наномоларни работни разтвори за in-vitro употреба.

GDF-8 одобрен ли е от FDA?

Публикуваните преклинични протоколи обикновено използват работни концентрации от 10–100 ng/mL за in-vitro експерименти с клетъчни култури (изследвания на атрофия на миотуби, репортерни клетъчни асоаи, изследвания на свързване), и 0.1–10 mcg на администрация за in-vivo протоколи за индуциране на атрофия при гризачи. Флакон от 1 mg, реконституиран с 1.0 mL бактериостатична вода, дава 1 mg/mL — разреждане в PBS или културна среда осигурява наномоларни работни разтвори за in-vitro употреба.

Is GDF-8 FDA approved?

Не, GDF-8 / миостатинът не е одобрен от FDA, EMA, MHRA или друг голям регулаторен орган за терапевтична употреба при хора. Изследванията върху миостатиновия път са довели до създаването на клинично етапни антагонисти (анти-миостатинови антитела, разтворим ActRIIB-Fc, генна терапия с фолистатин), някои от които са достигнали късни фази на изпитвания за мускулна дистрофия и саркопения, но рекомбинантният GDF-8 сам по себе си не е терапевтичен. Целият GDF-8, продаван от доставчици само за изследователска употреба, е предназначен за лабораторни изследвания и не трябва да се прилага на хора.

Как трябва да се съхранява GDF-8?

Лиофилизирани флакони: съхраняват се в хладилник при 2–8°C за краткосрочно използване или при −20°C за дългосрочно съхранение на неотворени флакони. Разтвор след реконституиране: съхранява се в хладилник при 2–8°C, използва се в рамките на 30 дни за общи протоколи или в рамките на 7 дни за изследвания на афинитет, изискващи строга калибрация. Не замразявайте реконституирания разтвор — рекомбинантните димерни протеини са особено чувствителни към денатурация при замразяване и размразяване. Защитавайте от пряка светлина по всяко време. Препоръчително е използването на носителен протеин (BSA при 0.1%) за работни разредения под 100 mcg/mL.

Как да реконституирам GDF-8?

Следвайте процедурата за реконституция, описана по-горе. Добавете бактериостатична вода по стената на флакона (не върху лиофилизираната маса), леко разбъркайте и оставете за 5–10 минути за пълно разтваряне. Не не Разклатете флакона — интензивно разбъркване може да наруши междумолекулните дисулфидни връзки и да намали активността. Правилно реконституираният разтвор е прозрачен и безцветен, без видими частици. За флакон от 1 mg + 1,0 mL разтворител работната концентрация е 1 mg/mL.

Защо спецификацията за чистота е 95%, а не 99%?

Рекомбинантни протеини като GDF-8 не могат да достигнат стандарта за чистота ≥99% при HPLC, характерен за малки синтетични пептиди, поради присъщата хетерогенност във всяка рекомбинантна експресна система — различни фолдинг интермедиати и форми на дисулфидни изомери се появяват като свързани пикове при HPLC, които не са примеси, а изоформи на целевия протеин. ≥95% чистота при HPLC е стандартната спецификация за изследователски цели за GDF-8 и подобни рекомбинантни дисулфидно свързани димерни протеини. SDS-PAGE обикновено показва очакваната лента от ~25,8 kDa при нередуциращи условия и ~12,9 kDa мономер при редуциращи условия.

Какви дози предлага MedsBase?

MedsBase предлага рекомбинантен GDF-8 (Миостатин) в лиофилизирани флакони от 1 mg. Флаконът е наличен в опаковки от 10 или 20 флакона. Всички флакони са с чистота ≥95% при HPLC анализ и се доставят с сертификат за анализ по желание.

Могат ли GDF-8 и Follistatin 344 да се използват заедно в изследвания?

Да — това е каноничният случай на употреба. Двете се използват в комбинация по три основни начина: (1) измерване на афинитета на свързване чрез SPR, ELISA или ITC на взаимодействието между фолистатин и миостатин; (2) клетъчни тестове за атрофия/възстановяване, при които GDF-8 предизвиква атрофия на миотубите, а съвместното лечение с фолистатин ги възстановява; и (3) in-vivo изследвания, при които GDF-8 усилва фенотип на отслабване, който съвместното прилагане на фолистатин смекчава. Обратната фармакологична двойка е основополагаща за изследователския дизайн в областта на миостатиновата ос.

Предизвиква ли GDF-8 странични ефекти при изследвания?

Основният целеви ефект на рекомбинантния GDF-8 в изследователските модели е мускулна атрофия — това е преднамереното фармакологично действие, а не страничен ефект. Извънцелевите находки включват умерени ефекти върху сърдечната и мастната тъкан, които са в съответствие с по-ниското ниво на експресия на ActRIIB в тези отдели. При много високи дози могат да се наблюдават по-широки ефекти, свързани с TGF-β-суперсемейството, върху фиброзата и възпалението, които се дължат на кръстосана връзка между рецепторите за активин и GDF-11 пътища.

Какъв е полуживотът на GDF-8?

В предклиничните изследвания рекомбинантният зрял GDF-8 има плазмен полуживот от приблизително 2–4 часа след интравенозно прилагане. Ендогенно зрелият миостатин циркулира, свързан със своя пропротеин (латентен комплекс) и с фолистатин/други свързващи протеини, което значително удължава ефективния тъканен полуживот. За изследователски протоколи рекомбинантният активен димер се прилага без пропротеина, за да достави “свободен” миостатин към ActRIIB рецептора.

Защо GDF-8 е открит първоначално?

GDF-8 е идентифициран от McPherron, Lawler и Lee в Johns Hopkins (Nature 1997) чрез дегенеративна-PCR скринингова стратегия, предназначена да открие нови членове на TGF-β-суперсемейството. Целевото нарушаване при мишки произвежда животни с два до три пъти по-голяма скелетна мускулна маса в сравнение с дивите контроли — изключително ясен фенотип, който незабавно установи миостатина като доминиращ физиологичен негативен регулатор на мускулния растеж. Връзката с естествено възникващите “двойно-мускулни” фенотипове при белгийската синя крава и уипет кучета е установена в рамките на месеци, а случай с MSTN-мутация при човек е публикуван в NEJM през 2004 г.

Колко време отнема GDF-8 да покаже ефекти в предклинични изследвания?

In-vitro ефектите върху фосфорилирането на Smad2/Smad3 се откриват в рамките на минути след излагане на клетките. Атрофията на миотубите в клетъчните тестове се измерва в рамките на 24–72 часа. In-vivo атрофичните фенотипове в гризачните модели се развиват в течение на 1–4 седмици от редовното прилагане, като кинетиката зависи от дозата, пътя на прилагане и базисното ниво на мускулната маса на моделния организъм.

Мога ли да поръчам GDF-8 за международна доставка?

Да. MedsBase изпраща GDF-8 по целия свят от нашата специализирана мрежа за доставка на пептиди. Поръчките, съдържащи само пептиди, се ползват от нашата самостоятелна услуга за доставка на пептиди. Всички поръчки се изпращат в температурно-контролирана опаковка с пълен проследяващ номер и са покрити от нашата Политика за повторна изпратка.

Други пептиди за анаболични, мускулни и изследвания на растежната ос

• Фолистатин 344 — Миостатин / активин антагонистичен свързващ протеин — обратната фармакологична двойка на GDF-8
• IGF-1 LR3 — Дълъг-аргинин рекомбинантен IGF-1 аналог — анаболичен стимул от противоположния път чрез IGF-1R
• TB-500 (Тимозин Бета-4) — Системен фрагмент за заздравяване — изследвания на мускулно и сърдечно възстановяване
• CJC-1295 с DAC — Дългодействащ GHRH аналог — изследвания на растежната хормонална ос
• Серморелин — По-краткодействащ GHRH(1-29) аналог — изследвания на естествените GH-импулси

Допълнителна информация

Още опции в Пептиди

Класирани според скорошния обем на поръчки в MedsBase — какво избират други клиенти в тази категория.

BPC-157

US$115.00 – US$705.00Cenové rozpětí: US$115.00 až US$705.00

Retatrutide

US$310.00 – US$6,515.00Cenové rozpětí: US$310.00 až US$6,515.00

BAC вода (Бактериостатична вода)

US$50.00 – US$150.00Cenové rozpětí: US$50.00 až US$150.00

NAD⁺

US$210.00 – US$1,975.00Cenové rozpětí: US$210.00 až US$1,975.00