HMG (Gonadotropina Menopausale Umana / Menotropina) — Grado Ricerca

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Cos'è l'HMG (Menotropina)?

HMG — Gonadotropina Menopausale Umana, anche conosciuta come menotropina (CAS 61489-71-2) — è una preparazione di ormone glicoproteico derivato dalle urine contenente quantità uguali di attività biologica di LH (ormone luteinizzante) e FSH (ormone follicolo-stimolante), standardizzata a 75 IU di ciascuno per flaconcino. È purificata mediante cromatografia a scambio ionico e a gel-filtrazione dalle urine raccolte di donne in postmenopausa, che hanno naturalmente un'elevata produzione di gonadotropine ipofisarie (LH e FSH tipicamente 50–100+ mIU/mL ciascuno) a causa della perdita dell'inibizione a feedback negativo ovarico che accompagna la menopausa.

Il termine “menopausale” nel nome si riferisce a questa fonte: l'urina postmenopausale è la fonte naturale più concentrata di LH e FSH disponibile per la purificazione su scala industriale, e l'hMG è stato prodotto da questa fonte sin dai primi anni '60 (la preparazione originale Pergonal sviluppata da Cesare Serono). Il perfezionamento compositivo dell'hMG è evoluto sostanzialmente nel corso dei decenni — le preparazioni precedenti avevano rapporti LH:FSH altamente variabili e carichi significativi di impurità proteiche; le preparazioni moderne (alla base del nostro materiale di grado di ricerca) sono standardizzate a 75:75 IU di attività biologica per flaconcino con una purezza HPLC ≥99%.

L'hMG è lo strumento farmacologico canonico delle doppie gonadotropine. Mentre l'HCG attiva selettivamente il LHCGR, mentre l'LH puro (ricombinante Luveris) attiva selettivamente il LHCGR con un'emivita fisiologica, mentre l'FSH puro (ricombinante Gonal-F / Puregon) attiva selettivamente il FSHR, l'hMG attiva entrambi i recettori simultaneamente in un rapporto fisso 1:1. I due recettori sono espressi su diverse popolazioni cellulari all'interno della gonade — LHCGR sulle cellule di Leydig / cellule della teca / granulosa luteinizzata / corpo luteo; FSHR sulle cellule di Sertoli / granulosa murale — quindi l'attivazione duale produce uno stimolo gonadotropico fisiologico completo che imita più da vicino l'output ipofisario endogeno a metà ciclo rispetto all'attivazione di un solo recettore.

Una sfumatura rilevante per la ricerca: la co-purificazione dell'HCG. Le analisi compositive pubblicate delle preparazioni di hMG derivate dalle urine riportano che la maggior parte dell'attività biologica in vivo del recettore LH è in realtà attribuibile alla traccia di HCG co-purificata dalle urine postmenopausali — circa il 95% dell'attività biologica mediata dal recettore LH secondo alcune analisi (Wolfenson et al., 2005). Questo perché HCG e LH si legano allo stesso LHCGR con affinità simile, ma l'HCG ha un'emivita plasmatica di 33–37 h rispetto ai ~20 min dell'LH, quindi anche piccole quantità di HCG dominano il segnale cumulativo equivalente all'LH in vivo. Questo è parte del motivo per cui l'hMG produce una stimolazione sostenuta delle cellule di Leydig nonostante l'attività “LH” nominale dell'LH stessa sia di breve durata. Per i protocolli di ricerca in cui questa distinzione è importante (farmacologia dell'LH puro rispetto al segnale misto LH contaminato da HCG), l'LH ricombinante (Luveris) è lo strumento più pulito; per i protocolli in cui l'attivazione duale di LHCGR + FSHR in un rapporto fisiologico 1:1 è l'obiettivo, l'hMG è il riferimento canonico.

Meccanismo d'azione — Attivazione duale di LHCGR + FSHR

Il meccanismo dell'hMG è la somma duale delle sue due attività componenti, entrambe ben caratterizzate in farmacologia endocrina:

• LH (e HCG co-purificato) → attivazione di LHCGR — La componente LH (e le tracce di HCG che si co-purificano dall'urina postmenopausale) si lega al recettore LH/CG sulle cellule di Leydig (testicolo) e sulle cellule della teca/granulosa/luteali (ovaio). L'accoppiamento a Gs aumenta il cAMP, attiva la PKA, regola positivamente il trasporto mitocondriale del colesterolo mediato da StAR e induce gli enzimi steroidogenici CYP11A1/CYP17A1/3β-HSD/17β-HSD — guidando la biosintesi de novo del testosterone (maschio) o dell'androstenedione (femmina).
• FSH → attivazione di FSHR — La componente FSH si lega al recettore FSH sulle cellule di Sertoli (testicolo) e sulle cellule della granulosa murale (ovaio). Anche FSHR è accoppiato a Gs, ma il suo programma a valle è distinto: nelle cellule di Sertoli l'attivazione di FSHR promuove la produzione di proteina legante gli androgeni (ABP), inibina B e il programma di supporto strutturale che sostiene la spermatogenesi; nelle cellule della granulosa l'attivazione di FSHR stimola CYP19A1 (aromatasi), convertendo gli androgeni derivati dalle cellule della teca in estrogeni, e promuove la maturazione follicolare attraverso gli stadi antrali e pre-ovulatori.
• Modello combinato a due cellule e due gonadotropine — Il classico quadro endocrino. Nel testicolo maschile, le cellule di Leydig stimolate da LH producono testosterone, che diffonde nelle adiacenti cellule di Sertoli dove la proteina legante gli androgeni indotta da FSH e la macchina metabolica delle cellule di Sertoli lo convertono nel microambiente ad alto testosterone intratesticolare richiesto per la spermatogenesi. Nell'ovaio femminile, le cellule della teca stimolate da LH producono androgeni, che diffondono nelle adiacenti cellule della granulosa dove l'aromatasi indotta da FSH li converte in estrogeni. Il modello a due cellule e due gonadotropine è il quadro canonico, e l'hMG è lo strumento farmacologico canonico per coinvolgere simultaneamente entrambe le metà.
• Desensibilizzazione recettoriale e tachifilassi — Sia LHCGR che FSHR subiscono desensibilizzazione mediata da arrestina dopo un'esposizione prolungata all'agonista. La somministrazione ripetuta di hMG ad alte dosi può causare downregulation recettoriale — un fenomeno ben documentato nella ricerca farmacologica sulle gonadotropine rilevante per i protocolli di dosaggio cronico.
• Feedback ipotalamo-ipofisario — Come con l'HCG, la produzione di steroidi gonadici stimolata dall'hMG retroagisce sull'ipotalamo e sull'ipofisi sopprimendo la secrezione endogena di GnRH e LH/FSH. Nel contesto della ricerca sulla soppressione dell'asse HPG (terapia sostitutiva con testosterone, esposizione ad AAS, antagonismo farmacologico del GnRH), l'hMG bypassa il blocco ipotalamo-ipofisario agendo direttamente sui recettori gonadici — preservando sia la funzione delle cellule di Leydig (lato LH) che la funzione di supporto alle cellule di Sertoli/spermatogenesi (lato FSH) simultaneamente, caratteristica che distingue l'hMG dai protocolli con HCG puro in questo contesto di ricerca.

Il profilo farmacocinetico dell'hMG riflette in larga misura quello dei suoi componenti: l'attività FSH persiste con un'emivita terminale di 30–40 h, l'attività equivalente all'LH è dominata dall'HCG co-purificato a lunga emivita (33–37 h), e la preparazione combinata produce una stimolazione duale delle gonadotropine sostenuta per 24–72 h per dose. Il dosaggio tipico nei protocolli di ricerca è di 75–225 UI per via sottocutanea giornaliera negli studi su roditori o soggetti umani — equivalente a 1–3 flaconcini della concentrazione 75 UI.

Applicazioni della Ricerca Pubblicata

L'hMG è utilizzato in contesti di ricerca di laboratorio che studiano:

• Farmacologia delle gonadotropine — il riferimento canonico per il dualismo recettoriale — agonista duale LHCGR + FSHR più citato nella ricerca pubblicata sulle gonadotropine; composto di riferimento standard per distinguere la segnalazione da LH solo vs FSH solo vs gonadotropine combinate
• Ricerca sull'induzione della spermatogenesi — nei modelli roditori di ipogonadismo ipogonadotropo, l'hMG (con o senza HCG supplementare) è lo strumento canonico per indurre la spermatogenesi ripristinando sia la produzione di testosterone delle cellule di Leydig che il supporto FSH alle cellule di Sertoli; il ciclo standard nei protocolli di ricerca è di 75–150 UI per via sottocutanea tre volte alla settimana per 6–24 mesi nella ricerca clinico-traslazionale
• Ricerca sulla stimolazione ovarica femminile — strumento storico fondante della ricerca sulla fecondazione in vitro; l'hMG promuove lo sviluppo follicolare fino agli stadi antrali e pre-ovulatori nei protocolli pubblicati di induzione dell'ovulazione, tipicamente combinato con HCG come trigger ovulatorio; ampiamente utilizzato nella ricerca sulla sindrome dell'ovaio policistico (PCOS), infertilità inspiegata e tecnologie di riproduzione assistita
• Ricerca sul modello a due cellule e due gonadotropine — il quadro teorico canonico della farmacologia della steroidogenesi gonadica; l'hMG è lo strumento standard per attivare simultaneamente entrambe le componenti del modello; la ricerca pubblicata su co-colture di Sertoli-Leydig e teca-granulosa utilizza l'hMG per riprodurre lo stimolo fisiologico duale sui recettori
• Ricerca sulla soppressione-recupero dell'asse HPG — nei modelli di ricerca pubblicati dove LH/FSH endogeno è stato soppresso (da testosterone esogeno, esposizione ad AAS o antagonismo del GnRH), l'hMG preserva sia la funzione delle cellule di Leydig che delle cellule di Sertoli tramite l'attivazione diretta dei recettori gonadici — distinguendosi dai protocolli con solo HCG che preservano solo la funzione lato LH e rischiano l'atrofia delle cellule di Sertoli
• Farmacologia comparativa vs LH puro / FSH puro / HCG — i confronti testa a testa pubblicati tra hMG e LH ricombinante (Luveris), FSH ricombinante (Gonal-F / Puregon), HCG ricombinante (Ovidrel) e varie combinazioni sono ampi; l'hMG è il riferimento misto 1:1 di derivazione urinaria rispetto al quale tutti questi vengono valutati
• Sviluppo follicolare e biologia delle cellule della granulosa — la ricerca pubblicata su colture follicolari ex-vivo e su cellule della granulosa primarie utilizza hMG per stimolare simultaneamente la produzione di androgeni da parte delle cellule della teca e l'induzione dell'aromatasi nelle cellule della granulosa — lo stimolo in-vitro più fisiologicamente rilevante disponibile
• Biologia del corpo luteo — l'attivazione sostenuta del LHCGR da parte del componente LH (e dell'HCG co-purificato) mantiene la funzione del corpo luteo e la produzione di progesterone; utilizzato nella ricerca sulla fase luteale e sulla transizione luteo-placentare

Per un contesto più ampio sui peptidi di ricerca dell'asse HPG e del sistema riproduttivo in questo catalogo, vedere HCG (Gonadotropina Corionica Umana) (agonista puro del LHCGR — confronto diretto; solo attività lato LH), Kisspeptina-10 (agonista del Kiss1R ipotalamico — guida la pulsatività endogena del GnRH), PT-141 (Bremelanotide) (farmacologia del recettore della melanocortina — ricerca sulla funzione sessuale), e Ossitocina Acetato (ormone peptidico della neuroipofisi). Esplora l'intero catalogo di peptidi e composti di ricerca.

Concentrazioni e Dosaggi Disponibili

MedsBase dispone di HMG (menotropina estratta da urina) in un'unica forza di fiale liofilizzate calibrate sull'unità standard di bioattività 1:1 LH:FSH. La fiala è disponibile in confezioni da 10 o 20 fiale:

La fiala da 75:75 IU è l'unità dose di riferimento internazionale e il formato utilizzato in quasi tutta la ricerca pubblicata sulle gonadotropine e nella pratica clinica. La somministrazione di più fiale (150 IU, 225 IU per somministrazione) è standard per protocolli a dosaggio più elevato. La confezione da 20 fiale è l'acquisto più economico per IU per protocolli a ciclo esteso o con coorti multiple.

Confronto — HMG vs HCG

HCG e hMG sono i due preparati gonadotropinici derivati dall'urina presenti in questo catalogo, e agiscono sul sistema dei recettori gonadotropinici in modi meccanicamente distinti. HCG è un puro agonista del recettore LH/CG — attivazione solo delle cellule di Leydig / cellule della teca. hMG è il preparato duale LH + FSH — coinvolge entrambe le metà del modello a due cellule e due gonadotropine simultaneamente. La scelta tra di essi nella ricerca dipende dal fatto che il protocollo richieda l'attivazione solo del lato LH o l'attivazione combinata del lato LH + lato FSH.

Per la ricerca focalizzata sulla doppia attivazione di LHCGR + FSHR, l'induzione della spermatogenesi o il modello canonico a due cellule e due gonadotropine, l'hMG è il composto di riferimento standard. Per la ricerca focalizzata sulla stimolazione esclusiva delle cellule di Leydig, il trigger dell'ovulazione o la farmacologia specifica di LHCGR dell'HCG, HCG è lo strumento più mirato. Vedi anche Kisspeptina-10 per la ricerca a monte sulla pulsatilità di Kiss1R/GnRH.

Conservazione e ricostituzione

Prima della ricostituzione: conservare i flaconcini liofilizzati refrigerati a 2–8 °C nella confezione originale per le scorte di lavoro a breve termine. Per lo stoccaggio a lungo termine, congelare i flaconcini non aperti a −20 °C (stabile ≥36 mesi a −20 °C; ≥18 mesi a 2–8 °C). La polvere liofilizzata è stabilizzata con mannitolo o lattosio e tollera ragionevolmente brevi esposizioni a temperatura ambiente durante la manipolazione, ma deve essere riportata in frigorifero prontamente. Proteggere dalla luce.

Procedura di ricostituzione: per ogni flaconcino da 75 UI, iniettare 1,0 mL di acqua batteriostatica lungo la parete laterale del flaconcino (non direttamente sulla polvere liofilizzata) — questo produce una scorta di lavoro di 75 UI di LH + 75 UI di FSH per mL. Per i protocolli di ricerca che necessitano di concentrazioni più elevate (pool di più flaconcini per una dose singola più alta), ricostituire 2–3 flaconcini con lo stesso 1,0 mL totale di diluente per ottenere 150–225 UI/mL. Agitare delicatamente per sciogliere — non scuotere, non usare il vortex. La miscelazione ad alto taglio dissocia gli eterodimeri α/β sia dei componenti LH che FSH e distrugge la bioattività del recettore delle gonadotropine. La polvere liofilizzata a base di mannitolo di solito si scioglie entro 30–60 secondi con un delicato agitamento.

Regole critiche di conservazione per il materiale ricostituito: una volta ricostituito, conservare a 2–8 °C e utilizzare entro 30 giorni. Non congelare l'hMG ricostituito — i cicli di congelamento-scongelamento dissociano gli eterodimeri α/β di LH e FSH (lo stesso vincolo fisico-chimico dell'HCG) e distruggono irreversibilmente la bioattività. Proteggere dalla luce. Scartare se compaiono torbidità, particolato o marcato cambiamento di colore. Per i protocolli di ricerca che richiedono più aliquote, preparare le aliquote al momento della ricostituzione e conservarle separatamente a 2–8 °C anziché congelarle.

Domande frequenti

Qual è la differenza tra HMG e HCG?

HCG è un agonista puro del recettore LH/CG — un singolo ormone glicoproteico (CAS 9002-61-3) che lega e attiva solo il LHCGR sulle cellule di Leydig / teca / granulosa / luteali. L'hMG è una miscela 1:1 di attività biologica di LH e FSH — ormoni glicoproteici distinti (CAS combinato 61489-71-2) che legano sia il LHCGR (lato LH) che il FSHR (lato FSH). La conseguenza clinica e di ricerca è che l'hMG produce una stimolazione duale del recettore che coinvolge entrambe le metà del modello a due cellule e due gonadotropine (Leydig + Sertoli nei maschi; teca + granulosa nelle femmine), mentre l'HCG produce una stimolazione singola del recettore solo sul lato LHCGR.

Qual è la co-purificazione di HCG nell'hMG e perché è importante per la ricerca?

Le analisi compositive pubblicate dei preparati di hMG derivati dalle urine riportano che approssimativamente Il 95% della bioattività mediata dal recettore LH in vivo è effettivamente attribuibile alla traccia di HCG co-purificata dalle urine postmenopausali, piuttosto che all'LH stesso (Wolfenson et al., 2005). Questo perché HCG e LH si legano allo stesso LHCGR con affinità simile, ma l'HCG ha un'emivita plasmatica di 33–37 h rispetto ai ~20 min dell'LH — quindi anche piccole quantità di HCG co-purificata dominano il segnale cumulativo equivalente all'LH in vivo. Per i protocolli di ricerca in cui questa distinzione è rilevante (ad esempio, confrontare la farmacologia dell'LH puro rispetto al segnale misto di LH contaminato da HCG), l'LH ricombinante (Luveris) è lo strumento più pulito. Per i protocolli in cui l'attivazione duale di LHCGR + FSHR in un rapporto fisso 1:1 è l'obiettivo, l'hMG è il riferimento canonico.

Perché l'hMG è ottenuto dalle urine di donne postmenopausali?

Le donne postmenopausali perdono l'inibizione a feedback negativo ovarico sull'asse ipotalamo-ipofisario, il che aumenta drasticamente la produzione di LH e FSH ipofisari — i tipici livelli sierici di LH e FSH postmenopausali sono di 50–100+ mIU/mL ciascuno, un ordine di grandezza superiore rispetto ai valori premopausali. Entrambi gli ormoni vengono poi eliminati per via renale nelle urine in forma concentrata. Pertanto, le urine postmenopausali raccolte rappresentano la fonte naturale più concentrata di LH + FSH per l'estrazione su scala industriale. L'industria dell'hMG è stata costruita su questa intuizione nei primi anni '60 (Pergonal era la preparazione originale della Serono) e continua ancora oggi, sebbene gran parte del mercato clinico si sia spostato verso preparazioni ricombinanti di LH puro e FSH puro.

Quali intervalli di dosaggio pubblicati sono stati utilizzati nella ricerca?

L'uso nei protocolli di ricerca a dose singola è tipicamente di 75–225 UI SC per somministrazione (1–3 fiale della concentrazione di 75 UI), con somministrazione 3×/settimana o giornaliera nei protocolli cronici. I protocolli di induzione della spermatogenesi nella ricerca pubblicata sull'ipogonadismo ipogonadotropo utilizzano tipicamente 75–150 UI 3×/settimana per 6–24 mesi in combinazione con HCG (l'HCG fornisce una stimolazione aggiuntiva delle cellule di Leydig). I protocolli di coltura in vitro delle cellule di Sertoli o delle cellule della granulosa utilizzano tipicamente 1–10 UI/mL nel mezzo di crescita. I ricercatori dovrebbero consultare la letteratura primaria appropriata per la specie, il modello e l'endpoint.

Qual è la differenza tra hMG e FSH ricombinante puro (Gonal-F / Puregon)?

L'FSH ricombinante puro (follitropina alfa / Gonal-F; follitropina beta / Puregon; prodotto in cellule CHO da cDNA clonati di FSH α e β) contiene solo bioattività FSH — nessun LH, nessun HCG. L'hMG contiene sia bioattività LH che FSH in rapporto 1:1 (più tracce di HCG). Per i protocolli di ricerca che necessitano di attivazione pura del FSHR isolata dalla segnalazione LHCGR, l'FSH ricombinante è lo strumento corretto. Per i protocolli che necessitano di attivazione duale combinata dei recettori in rapporto fisiologico, l'hMG è lo strumento corretto. Studi pubblicati testa a testa nella ricerca sulla stimolazione ovarica hanno confrontato i due con endpoint di sviluppo follicolare ampiamente equivalenti ma con profili di risposta all'estradiolo leggermente diversi (l'hMG tende a produrre un estradiolo leggermente più alto a metà ciclo grazie al substrato androgenico fornito dall'LH per l'aromatasi delle cellule della granulosa).

Perché l'hMG ricostituito non può essere congelato?

La stessa ragione dell'HCG — sia LH che FSH sono eterodimeri composti da due subunità associate non covalentemente (α + β ciascuna). L'interazione α/β è stabile nella polvere liofilizzata (nessuna acqua per interrompere l'interazione) e stabile in soluzione acquosa refrigerata a 2–8 °C (la cinetica di dissociazione è lenta a basse temperature). Ma la formazione di cristalli di ghiaccio durante il congelamento separa fisicamente le subunità, che si riassociano solo inefficientemente allo scongelamento. Il risultato è che l'hMG congelato e scongelato conserva una grande frazione di immunoreattività ma perde una grande frazione di bioattività. L'hMG liofilizzato può essere congelato ed è stabile a −20 °C; l'hMG ricostituito no.

Qual è lo status normativo WADA dell'hMG?

L'hMG/menotropina è nella Lista delle Sostanze Proibite dell'Agenzia Mondiale Antidoping (WADA) sotto la classe S2 (Ormoni Peptidici, Fattori di Crescita, Sostanze Correlate e Mimetiche). È proibita in ogni momento — sia in competizione che fuori competizione — per gli atleti maschi. I ricercatori che conducono studi sull'uomo con hMG devono essere consapevoli di questo status normativo. Per la ricerca in vitro in laboratorio e la ricerca in vivo su roditori, lo status WADA è puramente informativo.

Come si confronta questo hMG da ricerca con le preparazioni cliniche di marca (Menopur, Menogon, Repronex)?

Le preparazioni cliniche di marca sono menotropina estratta dalle urine (Menopur, Menogon, Repronex; la storica preparazione Pergonal è stata in gran parte dismessa) confezionate sotto vari SKU del produttore per uso clinico nelle tecnologie di riproduzione assistita. L'hMG da ricerca fornito qui è la stessa preparazione estratta dalle urine con purezza ≥99% in HPLC, fornita senza etichetta per uso clinico e destinata esclusivamente alla ricerca di laboratorio. I ricercatori che cercano menotropina per uso clinico dovrebbero ottenerla attraverso una catena di approvvigionamento clinico; i ricercatori che cercano materiale da ricerca per farmacologia recettoriale in vitro, lavoro in vivo su roditori o altre applicazioni di laboratorio possono utilizzare il materiale fornito qui.

L'hMG può essere combinato con HCG, Kisspeptin-10 o testosterone nei protocolli di ricerca?

Sì — questi composti agiscono su diversi livelli dell'asse HPG e sono comunemente combinati nella ricerca pubblicata. Le combinazioni più pubblicate sono hMG + HCG (il protocollo clinico e di ricerca standard per l'induzione della spermatogenesi nei modelli di ipogonadismo ipogonadotropo — l'hMG fornisce supporto sul lato FSH, l'HCG aggiuntivo fornisce stimolazione supplementare sul lato LH); hMG + Kisspeptina-10 (dissociazione a monte + a valle — il kisspeptina stimola il GnRH endogeno mentre l'hMG fornisce stimolazione gonadica diretta); hMG + testosterone esogeno (per la ricerca sul recupero dalla soppressione dell'asse HPG, dove il testosterone sopprime LH/FSH endogeni e l'hMG bypassa la soppressione agendo direttamente sulla gonade). Ricostituire ciascuno separatamente e seguire le regole di conservazione specifiche di ogni composto — né hMG né HCG dovrebbero essere congelati una volta ricostituiti.

Altri Peptidi per la Ricerca sull'Asse HPG e la Riproduzione

• HCG (Gonadotropina Corionica Umana) — Agonista puro del recettore LH/CG — confronto diretto; attività solo sul lato LH
• Kisspeptina-10 — Agonista Kiss1R ipotalamico — regolatore a monte dell'asse HPG, stimola la pulsatilità del GnRH
• PT-141 (Bremelanotide) — Agonista del recettore della melanocortina-4 — ricerca sulla funzione sessuale
• Ossitocina Acetato — Nonapeptide ipofisario posteriore — ricerca sulla riproduzione e sul legame sociale
• Tesamorelin — Analogico del GHRH — asse endocrino diverso, comunemente studiato in combinazione
• BAC Water (Acqua Batteriostatica) — Necessario per ricostituire qualsiasi flaconcino liofilizzato — diluente sterile, conservato con alcol benzilico 0,9%

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