GDF-8 (Myostatin)

📦 Každá objednávka je pokryta naší Zárukou opětovného odeslání — pokud vaše zásilka nedorazí do 20 pracovních dnů, přeposíláme ji.

Co je GDF-8 (Myostatin)?

GDF-8 (Growth/Differentiation Factor 8), běžně známý jako myostatin, je členem nadrodiny transformujícího růstového faktoru beta (TGF-β) a hlavním fyziologickým negativním regulátorem hmotnosti kosterního svalstva. Poprvé byl charakterizován McPherronem, Lawlerem a Leem (Nature 1997) jako sekretovaný protein, jehož cílené narušení u myší vedlo k tvorbě zvířat s dvou- až trojnásobně větší hmotností kosterního svalstva než u kontrolních jedinců. Stejný gen byl rychle identifikován jako příčina fenotypu “dvojitého osvalení” u belgických modrých a piemontských krav, fenotypu Bully Whippet u dostihových chrtů a jednoho zdokumentovaného lidského případu výrazné infantilní hypermuskulatury (Schuelke et al., NEJM 2004) — všechny tyto případy nesly mutace MSTN s poruchou funkce.

Zralý myostatin vzniká posttranslačním zpracováním 375-aminokyselinového preproproteinu: signální peptid je odstraněn během sekrece, poté je prodomena (~243 aa) odštěpena furinovými proteázami, čímž se uvolní aktivní 109-aminokyselinový C-terminální zralý myostatin. Aktivní forma je homodimer dvou zralých monomerických řetězců kovalentně spojených intermolekulární disulfidovou vazbou, s apparentní hmotností přibližně 25,8 kDa na neredukujícím SDS-PAGE. Protein zaujímá kanonickou TGF-β cysteinovou uzlovou strukturu a váže se s vysokou afinitou na aktivinový receptor typu IIB (ActRIIB), čímž iniciuje Smad-zprostředkovanou signalizaci. Rekombinantní GDF-8 je dodáván jako vysoce čistý lyofilizovaný prášek pro rekonstituci s bakteriostatickou vodou. Myostatin není FDA, EMA, MHRA ani žádným jiným významným regulátorem pro terapeutické použití u lidí. Výzkumný DSIP prodávaný zde je dodáván FDA, EMA, MHRA ani žádným jiným významným regulátorem schválen pro lidské terapeutické použití. Výzkumný GDF-8 prodávaný zde je dodáván určen pouze pro laboratorní výzkum a není určen pro lidské ani veterinární podávání.

Mechanismus účinku — ActRIIB signalizace a osa Smad2/Smad3

Co činí GDF-8 mechanisticky výjimečným mezi ligandy nadrodiny TGF-β, je jeho dominantní role jako tonický brzda růstu svalů prostřednictvím dobře popsaného tříkrokového signálního kaskádového mechanismu zdokumentovaného ve výzkumných publikacích:

• vazba na receptor ActRIIB a nábor typu I receptorů — Zralý myostatinový homodimer se váže na aktivinový receptor typu IIB (ActRIIB) na povrchu kosterních svalových vláken a dalších buněčných typů. ActRIIB je konstitutivně aktivní serin/threonin kináza, která po vazbě myostatinu rekrutuje a trans-fosforyluje receptory typu I ALK4 (ActRIB) a ALK5 (TβRI). Stechiometrie ligand-receptor je 2:2:2 heterotetramer v aktivním komplexu. Knockout ActRIIB produkuje fenotyp podobný myostatinovému knockoutu, což potvrzuje identitu receptoru.
• fosforylace Smad2/Smad3 a nukleární translokace — Fosforylované receptory typu I ALK4/ALK5 fosforylují receptorově regulované Smady — konkrétně Smad2 a Smad3 v myostatinové dráze. Fosfo-Smad2/Smad3 tvoří heteromerní komplex se Smad4 (běžný Smad) a translokují do jádra, kde se vážou na Smad-vázající elementy v promotorech cílových genů a rekrutují transkripční kofaktory. Smad dráha je dominantní signální výstup pro myostatin v kosterním svalu.
• downstream transkripční efekty — upregulace atrogin-1/MuRF1 a suprese proteinové syntézy — Nukleární Smad komplex koordinuje transkripční program, který podporuje svalovou atrofii třemi konvergujícími mechanismy: indukcí ubiquitin-ligázových atrogenů (atrogin-1 / Fbxo32 a MuRF1 / Trim63) pro urychlení degradace proteinů; inhibicí Akt/mTOR-zprostředkované proteinové syntézy prostřednictvím křížové komunikace s IGF/inzulinovou osou; a supresí myogenních regulačních faktorů (MyoD, myogenin) pro zpomalení satelitními buňkami řízené opravy. Čistým efektem je snížená akrece svalových proteinů a při vysokých dávkách nebo chronické expozici zjevná atrofie.

Důležité pro výzkumný design je, že GDF-8 působí jako tonický inhibitor za fyziologických podmínek — svalová hmota je regulována rovnováhou mezi myostatinovým tonem (atrofickým) a IGF/Akt/mTOR signalizací (anabolickou). Proto se Follistatin 344 (antagonista myostatinu/aktivinu) a rekombinantní GDF-8 (samotný agonista) používají ve svalovém výzkumu — antagonista odstraní brzdu, zatímco rekombinantní ligand je experimentální nástroj, který kvantifikuje sílu brzdy a validuje antagonistickou aktivitu v testech vazby na receptor a reporterových buněk.

Publikované výzkumné aplikace

Rekombinantní GDF-8 se používá v laboratorním výzkumu ke zkoumání:

• Výzkum svalové atrofie a úbytku — in-vitro atrofické testy myotubů, ex-vivo svalové preparáty, in-vivo podávání k indukci reprodukovatelných atrofických fenotypů pro studium intervenčních strategií (McPherron et al., Nature 1997; Lee, Annu Rev Cell Dev Biol 2004)
• Validace myostatinových antagonistů — testy vazebné afinity, testy potence neutralizačních protilátek, testy obsazení receptorů pro programy objevování léků cílených na myostatinovou dráhu; kanonický výzkumný nástroj pro validaci follistatin 344, rozpustné fúzní proteiny ActRIIB-Fc a protilátky proti myostatinu
• Výzkum signalizační dráhy Smad2/Smad3 — kinetika fosforylace Smad, zobrazování nukleární translokace, reportérové testy s vazebným elementem Smad, interakce s dalšími členy TGF-β dráhy
• Výzkum transkripce atrogenů — analýza promotoru atrogin-1 (Fbxo32) a MuRF1 (Trim63), aktivita ubiquitin-proteasomového systému, interakce s autofágní osou
• Modely kachexie a sarkopenie — modely kachexie u hlodavců s nádory, sarkopenie u stárnoucích myší, atrofie indukovaná denervací — rekombinantní GDF-8 použitý k amplifikaci nebo replikaci fenotypu úbytku svalové hmoty
• Výzkum srdeční a další tkáně — myostatin je exprimován v nižších hladinách v srdci, tukové tkáni a dalších tkáních; publikovaný výzkum zkoumá účinky GDF-8 v modelech hypertrofie kardiomyocytů a biologii tukové tkáně
• Srovnávací výzkum TGF-β superrodiny — porovnání s blízce příbuzným GDF-11 (90% sekvenční identity v zralé doméně) a aktivinem A (váže se na stejný receptorový systém); mechanistická analýza receptorové selektivity
• Inverzně-farmakologické párování s Follistatinem 344 — společná administrace s Follistatin 344 jako antagonistická složka umožňuje přímé kvantifikování vazebné stechiometrie myostatinu/antagonisty a záchranu GDF-8 indukované atrofie ve výzkumných modelech.

Pro širší kontext, kde se GDF-8 nachází v rámci anabolického/svalového výzkumu, viz Follistatin 344 jako kanonický antagonista myostatinu, IGF-1 LR3 pro anabolickou složku opačné dráhy (přímá agonie IGF-1R), a TB-500 pro výzkum systémové regenerace svalů a tkání. Prohlédněte si celý katalog výzkumných peptidů pro příbuzné sloučeniny.

Dostupné síly a koncentrace

MedsBase nabízí rekombinantní GDF-8 (Myostatin) v lyofilizovaných vialkách po 1 mg. Vialka je dostupná v balení po 10 nebo 20 vialkách s úplným návodem na rekonstituci:

GDF-8 je rekombinantní homodimerní protein o hmotnosti ~25,8 kDa dodávaný v HPLC čistotě ≥95%. Formát 1 mg vialky pokrývá typické výzkumné dávkové rozmezí: nanomolární pracovní koncentrace pro in-vitro vazebné testy a testy na reportérních buňkách spotřebují malé části vialky; in-vivo podávání u hlodavců používá dávky v mikrogramech na injekci, které spotřebují více vialky podle protokolu.

Srovnání – GDF-8 (Myostatin) vs Follistatin 344

Rekombinantní GDF-8 a Follistatin 344 jsou farmakologicky inverzní pár: GDF-8 je ligand a Follistatin 344 je protein s vysokou afinitou, který jej váže. Ve výzkumu jsou často používány společně, protože funkci antagonisty lze kvantifikovat pouze vůči ligandu. Tento vztah je podobný jiným známým inverzním párům ve farmakologii (např. agonista + antagonista stejného receptoru), ale na úrovni ligand-vazebného proteinu namísto úrovně receptoru.

Pro výzkum svalů se tato dvojice používá společně třemi hlavními způsoby: (1) měření vazebné afinity (povrchová plasmonová rezonance, ELISA, izotermická titrační kalorimetrie) interakce follistatin-myostatin; (2) buněčné testy atrofie/záchrany, kde GDF-8 indukuje atrofii myotubů a testuje se záchrana pomocí společného podání follistatinu; a (3) in vivo validace, kde GDF-8 zesiluje fenotyp úbytku svalové hmoty, který společná aplikace follistatinu zmírňuje. Tyto dva proteiny jsou mechanisticky komplementární a zřídka se studují izolovaně.

Skladování a rekonstituce

Před rekonstituci: lyofilizované lahvičky skladujte v chladničce při 2–8 °C v původním obalu pro krátkodobé pracovní zásoby. Pro dlouhodobé skladování neotevřených lahviček zmrazte při −20 °C. Lyofilizované GDF-8 je stabilní v chladničce až 12 měsíců a při −20 °C až 24 měsíců – o něco kratší dobu než malé syntetické peptidy, protože větší rekombinantní dimer s disulfidovými vazbami je náchylnější k chybnému skládání a agregaci v průběhu času. Vyhněte se cyklům zmrazování a rozmrazování lyofilizovaného prášku.

Postup rekonstituce: Aplikujte bakteriostatickou vodu po vnitřní stěně lahvičky (ne přímo na lyofilizovaný koláč). Pro 1mg lahvičku poskytuje 1,0 ml bakteriostatické vody pracovní koncentraci 1 mg\/ml. Jemně krouživě promíchejte — do ne skladujte v chladničce při 2–8 °C a použijte do 30 dnů pro optimální stabilitu. Rekonstituovaný roztok nezmrazujte – rekombinantní dimerické proteiny jsou obzvláště citlivé na denaturaci při zmrazování a rozmrazování, což vede k agregaci a ztrátě receptorové vazebné aktivity. Zlikvidujte jakoukoli lahvičku s projevy zákalu, sraženiny nebo změny barvy. Pro testy vazebné afinity vyžadující přesnou kalibraci dávka-odpověď používejte čerstvě rekonstituovaný roztok do 7 dnů pro nejreprodukovatelnější výsledky.

Po rekonstituci: Skladujte v chladničce při teplotě 2–8 °C a spotřebujte do 30 dnů pro optimální stabilitu. Rekonstituovaný roztok nezmrazujte — rekombinantní dimerní proteiny jsou obzvláště citlivé na denaturaci zmrazením a rozmrazením, která způsobuje agregaci a ztrátu vazebné aktivity na receptor. Likvidujte každou lahvičku vykazující zákal, sraženinu nebo změnu barvy. Pro testy vazebné afinity vyžadující přesnou kalibraci dávkové odpovědi používejte čerstvě rekonstituovaný roztok do 7 dnů pro co nejreprodukovatelnější výsledky.

Často kladené dotazy

K čemu se v výzkumu používá GDF-8 (Myostatin)?

a fúzních proteinů ActRIIB-Fc) a kvantifikaci vazebné stechiometrie ve farmakologických testech. Nepoužívá se k „zlepšení“ čehokoli ve výzkumných modelech – je to negativní regulátor, který chtějí vědci pochopit a nakonec inhibovat. Výzkumné GDF-8 prodávané zde je Follistatin 344 a fúzní proteiny ActRIIB-Fc) a kvantifikace vazebné stechiometrie ve farmakologických testech. Nepoužívá se k “vylepšení” čehokoli ve výzkumných modelech — je to negativní regulátor, kterému chtějí výzkumníci porozumět a nakonec jej inhibovat. Zde prodávaný GDF-8 výzkumné kvality je ne schválený FDA a je dodáván výhradně pro laboratorní výzkumné účely.

Jak se GDF-8 liší od Follistatin 344?

Tato dvojice představuje inverzní farmakologický pár. GDF-8 je aktivní ligand myostatinu — brzda svalového růstu, která prostřednictvím signalizace Smad2/Smad3 řídí atrofii. Follistatin 344 je vazebný protein s vysokou afinitou, který sekvestruje GDF-8 a aktivin a znemožňuje jejich dostupnost pro receptor. Ve výzkumných modelech GDF-8 indukuje nebo zesiluje fenotyp atrofie a follistatin 344 jej zvrací. Oba se běžně kombinují v testech vazebné afinity, buněčných záchranných testech a in-vivo validačních studiích antagonistů myostatinové dráhy.

Jak se liší GDF-8 od GDF-11?

GDF-8 (myostatin) a GDF-11 sdílejí přibližně 90% aminokyselinové identity v zralé doméně a vážou se na stejný receptor ActRIIB s porovnatelnou afinitou. Funkční role jsou částečně překrývající, ale liší se v tkáňové distribuci: GDF-8 je převážně exprimován v kosterním svalstvu a je dominantním regulátorem svalové hmoty; GDF-11 je exprimován širším spektrem tkání a je studován v souvislosti se srdcem, nervovou soustavou a hematopoetickým systémem. Těsná sekvenční podobnost činí vývoj selektivních antagonistů hlavním cílem současného výzkumu.

Jaká je typická výzkumná dávka GDF-8?

Publikované preklinické protokoly obvykle používají pracovní koncentrace 10–100 ng/mL pro in-vitro experimenty s buněčnými kulturami (testy atrofie myotub, testy s reportérovými buňkami, studie vazby) a 0,1–10 mcg na podání pro in-vivo protokoly indukce atrofie u hlodavců. 1 mg lahvička rekonstituovaná s 1,0 mL bakteriostatické vody poskytne koncentraci 1 mg/mL – ředění do PBS nebo kultivačního média vytvoří nanomolární pracovní roztoky pro in-vitro použití.

Je GDF-8 schválen FDA?

Ne. GDF-8 / myostatin není schválen FDA, EMA, MHRA ani žádným jiným významným regulátorem pro terapeutické použití u lidí. Výzkum myostatinové dráhy přinesl antagonisty ve fázi klinických studií (protilátky proti myostatinu, solubilní ActRIIB-Fc, genová terapie follistatinem), z nichž některé dosáhly pozdních fází testů pro svalovou dystrofii a sarkopenii, ale rekombinantní GDF-8 samotný není terapeutikum. Veškerý GDF-8 prodávaný dodavateli pouze pro výzkumné účely je určen pro laboratorní výzkum a neměl by být podáván lidem.

Jak by měl být GDF-8 skladován?

Lyofilizované lahvičky: krátkodobě skladujte při 2–8 °C, dlouhodobě při −20 °C pro neotevřené lahvičky. Rekonstituovaný roztok: skladujte při 2–8 °C, používejte do 30 dnů pro obecné protokoly nebo do 7 dnů pro testy vazebné afinity vyžadující přesnou kalibraci. Rekonstituovaný roztok nezmrazujte – rekombinantní dimerické proteiny jsou obzvláště citlivé na denaturaci při zmrazení a rozmrazení. Chraňte před přímým světlem za všech okolností. Pro pracovní ředění pod 100 mcg/mL se doporučuje nosný protein (BSA v 0,1%).

Jak rekonstituovat GDF-8?

Postupujte podle výše uvedeného rekonstitučního postupu. Přidejte bakteriostatickou vodu po stěně lahvičky (ne přímo na lyofilizovaný prášek), jemně promíchejte a nechte 5–10 minut pro úplné rozpuštění. Ne ne protřepávejte lahvičku – intenzivní míchání může narušit intermolekulární disulfidové vazby a snížit aktivitu. Správně rekonstituovaný roztok je čirý a bezbarvý, bez viditelných částic. Pro lahvičku 1 mg + 1,0 mL ředidla je pracovní koncentrace 1 mg/mL.

Proč je specifikace čistoty 95% namísto 99%?

Rekombinantní proteiny jako GDF-8 nemohou dosáhnout standardu HPLC čistoty ≥99 %, který je typický pro malé syntetické peptidy, kvůli inherentní heterogenitě jakéhokoli rekombinantního expresního systému – různé intermediáty skládání a formy disulfidových izomerů se na HPLC jeví jako související píky, které nejsou nečistoty, ale izoformy cílového proteinu. HPLC čistota ≥95 % je standardní výzkumná specifikace pro GDF-8 a podobné rekombinantní disulfidem vázané dimerické proteiny. SDS-PAGE typicky vykazuje očekávaný pás ~25,8 kDa v neredukujících podmínkách a monomer ~12,9 kDa v redukujících podmínkách.

Jaké síly nabízí MedsBase?

MedsBase nabízí rekombinantní GDF-8 (Myostatin) v lyofilizovaných vialkách po 1 mg. Vialka je dostupná v balení po 10 nebo 20 vialkách. Všechny vialky jsou dodávány s HPLC čistotou ≥95 % a certifikátem analýzy dostupným na vyžádání.

Lze GDF-8 a Follistatin 344 kombinovat ve výzkumu?

Ano – toto je kanonický případ použití. Tyto dvě látky se běžně kombinují třemi hlavními způsoby: (1) měření vazebné afinity interakce follistatin-myostatin pomocí SPR, ELISA nebo ITC; (2) buněčné testy atrofie/záchrany, kde GDF-8 indukuje atrofii myotubulů a společná léčba follistatinem ji zachraňuje; a (3) in-vivo studie, kde GDF-8 zesiluje fenotyp chřadnutí, který společná aplikace follistatinu zmírňuje. Toto párování inverzní farmakologie je základem výzkumného designu osy myostatinu.

Způsobuje GDF-8 ve výzkumu vedlejší účinky?

Hlavním cílovým účinkem rekombinantního GDF-8 ve výzkumných modelech je svalová atrofie – toto je zamýšlený farmakologický účinek, nikoli vedlejší efekt. Mezi mimocílové nálezy patří mírné účinky na srdeční a tukové tkáně, které odpovídají nižší úrovni exprese ActRIIB v těchto kompartmentech. Při velmi vysokých dávkách lze pozorovat širší účinky související s nadrodinou TGF-β na fibrózu a zánět, které jsou přičítány zkřížené reakci receptorů s drahami aktivinu a GDF-11.

Jaký je poločas GDF-8?

V preklinickém výzkumu má rekombinantní zralý GDF-8 plazmatický poločas přibližně 2–4 hodiny po intravenózním podání. Endogenně cirkuluje zralý myostatin vázaný na svůj vlastní prodomen (latentní komplex) a na follistatin/ostatní vazebné proteiny, což výrazně prodlužuje efektivní tkáňový poločas. Pro výzkumné protokoly je rekombinantní aktivní dimer podáván bez prodomenu, aby dodal “volný” myostatin receptoru ActRIIB.

Proč byl GDF-8 původně objeven?

GDF-8 byl identifikován McPherronem, Lawlerem a Leem na Johns Hopkins (Nature 1997) pomocí degenerované-PCR screeningové strategie navržené k nalezení nových členů nadrodiny TGF-β. Cílená disrupce u myší vytvořila zvířata s dvakrát až třikrát větší hmotností kosterního svalstva než u divokých kontrol – nápadně jasný fenotyp, který okamžitě stanovil myostatin jako dominantní fyziologický negativní regulátor růstu svalů. Souvislost s přirozeně se vyskytujícími fenotypy “dvojitého svalstva” u belgických modrých krav a whippetů byla stanovena během měsíců a případ lidské mutace MSTN byl publikován v NEJM v roce 2004.

Jak dlouho trvá, než se projeví účinky GDF-8 v preklinickém výzkumu?

In-vitro účinky na fosforylaci Smad2/Smad3 jsou detekovatelné během minut po expozici buněk. Atrofie myotubulů v buněčných testech je měřitelná během 24–72 hodin. In-vivo atrofické fenotypy u hlodavců se vyvíjejí během 1–4 týdnů pravidelného podávání, přičemž kinetika závisí na dávce, způsobu podání a základní linii svalové hmoty modelového organismu.

Mohu si objednat GDF-8 pro mezinárodní přepravu?

Ano. MedsBase zasílá GDF-8 po celém světě prostřednictvím naší specializované sítě pro přepravu peptidů. Objednávky obsahující pouze peptidy se kvalifikují pro naši samostatnou službu přepravy peptidů. Všechny objednávky jsou odesílány v teplotně kontrolovaném balení s plným sledováním a jsou pokryty naším Zárukou opětovného odeslání.

Další peptidy pro výzkum anabolických účinků, svalů a růstové osy

• Follistatin 344 — Myostatin / aktivin antagonistická vazebná bílkovina — inverzně farmakologický pár k GDF-8
• IGF-1 LR3 — Dlouho-argininový rekombinantní analog IGF-1 — anabolický stimul opačnou cestou přes IGF-1R
• TB-500 (Thymosin Beta-4) — Systémový hojivý fragment — výzkum obnovy svalů a srdeční tkáně
• CJC-1295 with DAC — Dlouhodobě působící analog GHRH – výzkum růstové osy
• Sermorelin — Kratší působící analog GHRH(1-29) — výzkum přirozených pulzů růstového hormonu

Další čtení

Další možnosti v Peptidech

Řazeno podle nedávného objemu objednávek na MedsBase — co si ostatní zákazníci v této kategorii vybírají.

BPC-157

US$115.00 – US$705.00Ценови диапазон: от US$115.00 до US$705.00

Retatrutide

US$310.00 – US$6,515.00Ценови диапазон: от US$310.00 до US$6,515.00

BAC Water (Bakteriostatická voda)

US$50.00 – US$150.00Ценови диапазон: от US$50.00 до US$150.00

NAD⁺

US$210.00 – US$1,975.00Ценови диапазон: от US$210.00 до US$1,975.00